Os melhores equipamentos do mercado, com um time de experts prontos para o seu experimento.
O sequenciamento de DNA ou RNA visa determinar o código genético parcial ou total de um organismo ou de um fragmento de material genético, usando um conjunto de processos químicos e enzimáticos para determinar a ordem em que as bases nitrogenadas, Adenina (A), Citosina (C), Timina (T) e Guanina (G), se dispõem na sequência em questão.
Sequenciamento Sanger
O sequenciamento Sanger permite a análise de sequências de fragmentos de DNA com no mínimo 80 pares de bases (pb), resultando em leituras com tecnologia capilar de até 800 a 1000 pb, dependendo do equipamento e do material sob análise com até 96 amostras por experimento. Nossa plataforma genômica possui sequenciadores Sanger para análise em 4, 24, 48 e 96 capilares por vez.Nessa técnica, os produtos da reação de sequenciamento, marcados com fluorocromos, ao serem submetidos à eletroforese capilar, passam por um feixe de laser que promove a excitação dos fluorocromos. A luz por eles emitida é detectada por um fotomultiplicador que, por sua vez, transforma o sinal num gráfico, o eletroferograma. A interpretação desses resultados, com a transformação em leituras de código genético, é feita de acordo com a qualidade do eletroferograma.Esse método possui alta confiabilidade, além da possibilidade de leituras com até 1 Kb em cada direção de um fragmento de DNA, sendo ideal para estudo de genes específicos. Entretanto, possui um baixo throughput, o que limita o sequenciamento de genomas, transcriptomas e metagenomas.
Sequenciamento NGS
As tecnologias de sequenciamento da chamada “nova geração” (Next Generation Sequencing – NGS) promovem a análise do código genético em plataformas capazes de gerar informação sobre milhões de pares de bases (pb) em uma única corrida.Estas metodologias NGS são novas alternativas poderosas para estudos de genômica estrutural e funcional. Possuem o grande diferencial de proporcionarem o sequenciamento direto e paralelo de milhões e até bilhões de moléculas de DNA, aumentando consideravelmente a escala e a resolução das análises, além de reduzir a quantidade de amostra necessária. Esses grandes avanços obtidos com NGS podem ser diretamente aplicados para sequenciamento de:
– Genomas completos
– Metagenomas;
– RNA-Seq;
– Exomas;
– RNAs não codificantes;
– Pequenos RNAs;
– Amplicon;
– Regiões marcadas, imunoprecipitadas;
– Bibliotecas enriquecidas com fragmentos-alvo;
– Paleogenômica, entre diversas outras aplicações.
Os diversos fabricantes principais, como Illumina, Thermo/Life, Pacbio e Oxford Nanopore empregam tecnologias bastante diferentes, mas todos se baseiam no processamento paralelo massivo de fragmentos de DNA ao mesmo tempo, resultando em leituras menores (Illumina e Thermo/Life) ou muito maiores (Pacific Biosciences e Oxford Nanopore). Cada método e aplicação tem seu lado forte e lado fraco, e limites nas margens de erro e precisão nas leituras, bem como no custo por base, tendo cada um nichos de aplicação mais vantajosos.
Análise de fragmentos
A Análise de fragmentos visa fornecer serviços de genotipagem e microssatélites com uma alta eficiência, reprodutibilidade e qualidade através da utilização de uma série de metodologias de análise de fragmentos de DNA. Para isso, a análise é realizada utilizando-se utilizando primers marcados com fluorocromos, como ROX (DS30) ou LIZ (DS33), com posterior separação e leitura no conjunto de 16 capilares.
Assim, essa Plataforma é ideal para estudos de polimorfismos genéticos (diversidade genética), de epidemiologia molecular, evolutivos, de genética de população, de identificação humana, análises forenses e farmacogenômica.
